اندازه گیری هموگلوبین A2

·       مقدمه:

 يكي از تست هاي تشخيصي مهم جهت تأئيد وجود بتا تالاسمي مينور تعيين درصد هموگلوبين A2  مي باشد .هموگلوبين A2را می توان به روش های زیر اندازه گيری نمود:

 - کروموتوگرافی تعويض يونی

   1-ستون ميکرو

   2-HPLC (کروماتوگرافی تعويض يونی کاتيونيک)

- الکتروفورزاستات سلولز همراه با الوشن

اندازه گيری هموگلوبين A2  با استفاده از ستون ميکرو

كروماتوگرافي تعويض يوني از انواع كروماتوگرافي هاي مايع – جامد بوده كه بر اساس واكنش متقابل گروههاي باردار مولكول هموگلوبين و رزين ، جداسازي صورت مي گيرد. بر روي رزين يونهايي وجود دارد كه قابل تعويض با يونهاي همبار خود در هموليزات مي باشند. در اين روش از رزين آنيونيك دي اتيل امينواتيل سلولز DEAE52  استفاده مي گردد.

 

ادامه نوشته

اندازه گیری هموگلوبین A1C

هموگلوبین A1C

در افراد مبتلا به دیابت، میزان افزایش یافته قند خون باعث ایجاد تغییراتی در پروتئوم سلولهای مختلف ، همچنین پروتئوم خون و سرم خون می شود. در افراد مبتلا به دیابت، پروتئینهای مختلف سلولی و خارج سلولی بصورت غیر آنزیمی گلایکوزیله می شوند. که این گلایکوزیلاسیون باعث غیر فعال شدن اغلب این پروتئینها می شوند.

در سال 1950 محققین فعالیتهای خود را روی هموگلوبین متمرکز کرده بودند. پس از تعیین ساختمان سه‌بعدی هموگلوبین آن ها با کمک روش های کروماتوگرافی و الکتروفورز نشان دادند که چندین نوع هموگلوبین در گلبول های قرمز انسان وجود دارد. هموگلوبین (a2b2) A1، هموگلوبین (a2d2) A2 و هموگلوبین (a2g2) F از جمله آن هاست.

نوع دیگری از هموگلوبین HbA1C است. وقتی گلوکز خون وارد گلبول های قرمزمی شود به طریق غیرآنزیمی هموگلوبین آن ها را گلیکوزیله می‌کند. این هموگلوبین که هموگلوبین گلیکوزیله یا HbA1C نامیده می‌شود، در محل زنجیره بتای خود از طریق عامل آمین با گلوکز پیوند دارد. عامل آمین مربوط به سررشته پلی پیتیدی و یا گروههای آمین ریشه‌های لیزین می‌باشد.

در سال 1986 دکتر رهبر استاد دانشگاه تهران در جریان بررسی 1200 بیمار مبتلا به دیابت قندی، هموگلوبین گلبول های قرمز آن ها را با روش الکتروفورز مطالعه کرد. این افراد دارای طرح الکتروفورزی غیرطبیعی بودند. دکتر رهبر نشان داد که این طرح غیرطبیعی به علت وجود هموگلوبین گلیکوزیله (HbA1C) است. وی دریافت که میزان HbA1C در افراد مبتلا به دیابت قندی دو برابر گروه شاهد می‌باشد. مطالعات بعدی نشان داد که مقدار HbA1C بازتابی از میزان گلوکز در دو الی سه ماه گذشته است. ازدیاد HbA1C معرف نظارت نامناسب بر میزان گلوکز خون است. از این رو، ارزیابی HbA1C می‌تواند راهنمای پزشک در گزینش درمان مناسب باشد. برای سنجش HbA1C می‌توان از الکتروفورز، کروماتوگرافی و روش شیمیایی بهره گرفت.نسبت هموگلوبین گلیکوزیله که در حالت طبیعی پنج درصد است با غلظت گلوکز خون متناسب است.

و اما در سال ۲۰۰۰ آقای دکتر محمدی نژاد از مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک دانشگاه تهران مشخص کرد که در افراد مبتلا به دیابت آلبومین خون نیز بصورت غیر آنزیمی گلیکوزیله می شود

با استفاده از روش کنترل شخصی قند خون شما می توانید در هر ساعت از شبانه روز از مقدار قند خون مطلع شوید ولی قادر به این پیش بینی نیستید که قند خون شما روی هم رفته طی ماههای گذشته چقدر بالاتر از مقدار طبیعی بوده است. آزمایش "هموگلوبین A1C" دقیقاً همین کار را انجام می دهد. در واقع این آزمایش بهترین وسیله بریا ارزیابی بلند مدت قند خون طی 3-2 ماه اخیر است. این آزمایش به شما و پزشک معالجتان نشان می دهد که برنامه درمان و کنترل دیابت شما تا چه حد موفقیت آمیز بوده است. مزیت دیگر آزمایش هموگلوبین A1C اینست که می توان مشکلاتی مانند قند خون بالای بعد از غذا و یا در طول شب را که گاهی اوقات توسط اندازه گیری با گلوکومتر تشخیص داده نمی شود به خوبی شناسایی کند.

ادامه نوشته

متابوليسم بيلي روبين و بيماريهاي مرتبط با آن

 

بيلي روبين يك رنگدانه تتراپيرولي است كه از تخريب هِم (heme) هموگلوبين گلبولهاي قرمز مسن خون تو ليد مي شود . درهرروز به ازاي هركيلو گرم وزن بدن تقريباً 4 ميلي گرم از اين ماده توليد مي شود كه قسمت اعظم آن (85- 80 ) درصد از هموگلوبين و بقيه از تخريب سلولهاي اریتروئيد كه بيش از موعد درمغز استخوان طي روند خونسازي غير مؤثر (ineffectire erythropoiesis) ساخته شده اند و همچنين از تخريب هموپروتئين هاي مختلف مانند سيتوكروم p-450 وسيتوكرومc ايجاد مي شود . عمل تخريب در سلولهاي فاگوسيتي تك هسته اي طحال ، كبد و مغز استخوان صورت مي گيرد.

اولين مرحله د تبديل هم به بيلي روبين ،‌بازشدن اكسيداتيو مولكول هم درپل كربني توسط عمل آنزيم ميكروزمي هم اكسيژناز (heme oxygenase ) مي باشد اين آنزيم براي خود به اكسيژن و NADPH نياز دارد . فرآورده نهايي اين واكنش بيلي وردين، منواكسيد كربن و آهن مي باشد . واكنش دوم ، توسط آنزيم سيتوپلاسمي موسوم به بيلي وردين ردوكتاز (biliverdin reductase)كاتاليز مي شود. در اين واكنش پيوند متيلن مركزي بيلي وردين احياء شده و بيلي روبين توليد مي شود . بيلي روبين توليد شده درسلولهاي رتيكوآندوتليال تقريباً درآب نا محلول است . تين پروتوپورفيرين (tinprotoporphyrin)كه يك متالو- پورفيرين صناعي است، مهاركننده رقابتي قدرتمند هم اكسيژنازمي باشد . سودمندي اين تركيب در كاهش توليد بيلي روبين و پيشگيري از اثر سمي آن در شير خوران مي تواند باشد

ادامه نوشته

کروماتوگرافی

 

ریشه لغوی
کروماتوگرافی (chromatoghraphy) ، در زبان یونانی chroma یعنی رنگ و grophein یعنی نوشتن است.

اطلاعات اولیه
پر کاربردترین شیوه جداسازی مواد تجزیه‌ای کروماتوگرافی است که در تمام شاخه‌های علوم کاربردهایی دارد. کرماتوگرافی گروه گوناگون و مهمی از روش‌های جداسازی مواد را شامل می‌شود و امکان می‌دهد تا اجزای سازنده نزدیک به هم مخلوط‌های کمپلکس را جدا ، منزوی و شناسایی کند بسیاری از این جداسازی‌ها به روش‌های دیگر ناممکن است.

سیر تحولی رشد
• اولین روش‌های کروماتوگرافی در سال 1903 بوسیله میخائیل سوئت ابداع و نامگذاری شد. او از این روش برای جداسازی مواد رنگی استفاده کرد.
• مارتین و سینج در سال 1952 به پاس اکتشافاتشان در زمینه کروماتوگرافی جایزه نوبل دریافت کردند.

توصیف کروماتوگرافی
کروماتوگرافی را به دلیل اینکه در برگیرنده سیستمها و تکنیکهای مختلفی است نمی‌توان به طور مشخص تعریف کرد. اغلب جداسازی‌ها بر مبنای کروماتوگرافی بر روی مخلوطهایی از مواد بی‌رنگ از جمله گازها صورت می‌گیرد. کروماتوگرافی متکی بر حرکت نسبی دو فاز است ولی در کروماتوگرافی یکی از فازها بدون حرکت است و فاز ساکن نامیده می‌شود و دیگری را فاز متحرک می‌نامند. اجزای یک مخلوط به وسیله جریانی از یک فاز متحرک از داخل فاز ساکن عبور داده می‌شود. جداسازی‌ها بر اساس اختلاف در سرعت مهاجرت اجزای مختلف نمونه استوارند.

روش‌های کروماتوگرافی
روش‌های کروماتوگرافی را می‌توان ابتدا بر حسب ماهیت فاز متحرک و سپس بر حسب ماهیت فاز ساکن طبقه‌بندی کرد. فاز متحرک ممکن است گاز یا مایع و فاز ساکن ممکن است جامد یا مایع باشد. بدین ترتیب فرآیند کروماتوگرافی به چهار بخش اصلی تقسیم می شود. اگر فاز ساکن جامد باشد کروماتوگرافی را کروماتوگرافی جذب سطحی و اگر فاز ساکن ، مایع باشد کروماتوگرافی را تقسیمی می‌نامند.

انواع کروماتوگرافی
هر یک از چهار نوع اصلی کروماتوگرافی انواع مختلف دارد:
کروماتوگرافی مایع – جامد
کروماتوگرافی جذب سطحی
کروماتوگرافی لایه نازک
کروماتوگرافی تبادل یونی
کروماتوگرافی ژلی
کروماتوگرافی گاز – جامد
کروماتوگرافی مایع – مایع
کروماتوگرافی تقسیمی
کروماتوگرافی کاغذی
کروماتوگرافی گاز- مایع
کروماتوگرافی گاز – مایع
کروماتوگرافی ستون مویین

ادامه نوشته

محلول سازی

فک میکنم برای شروع بدنباشه از درس شیرین بیوشیمی شروع کنم از اونجا که توی آزمایشات بیوشیمی طرز ساخت محلول ها و به عبارتی رقت سازی  خیلی مهمه و معمولا همه اکثرا باهاش مشکل دارن به همین خاطر در نظر گرفتم تو این  پست کمی به این موضوع اشاره کنم امیدوارم مفید باشه و به دردتون بخورهنظر یادتون نره

استوکيومتري در محلول ها

 

بسياري از واکنش هاي شيميايي در محلول هاي آبي انجام مي شود، يعني محلولي که آب در آن به عنوان حلال است

غلظت مولي: تعداد مول هاي حل شده در يک ليتر از محلول است و واحد آن mol/l است که معمولاً به آن مولاريته مي گويند. مولاريته را با M نشان ميدهند. براي نمايش غلظت محلول HCl 0.01 مولار مي نويسند [HCl]=0.01M

 

M = n ÷ V
    M = غلظت محلول بر حسب mol/L,
    n = مول هاي حل شونده
    V = حجم محلول بر حسب (L)

نوآرايي فرمول بله صورت هاي
n = M x V

  V = n ÷ M

 

مثال1

محاسبه کنيد مولاريته محلول سديم کلرايد شامل 0.125 مول سديم کلريد در 0.5 ليتر آب چقدر است؟

M = n ÷ V in litres

n = 0.125mol

V in litres = 0.5L

[NaCl(aq)] = M = 0.125 ÷ 0.5 = 0.25M (or 0.25mol/L or 0.25mol L-1)

مثال 2

تعداد مول هاي مس سولفات را در 250 ميلي ليتر از محلول 0.02 مولار آن محاسبه کنيد؟

n = M x V

M = 0.02M

V = 250mL = 250 ÷ 1000 = 250 x 10-3L = 0.250L (since there are 1000mL in 1L)

n = 0.02 x 250 x 10-3 = 0.005mol

مثال 3

محاسبه کنيد حجم محلول پتاسيم برميد 0.8 مولار که داراي 1.6 مول پتاسيم برميد است؟

V = n ÷ M

n = 1.6mol

M = 0.80M

V = 1.6 ÷ 0.80 = 2.00L

 

مثال3

11.2 گرم شکر را در بالن 250 ميلي ليتري به حجم رسانده ايم، غلظت محلول چند مولار است؟

جرم مولي شکر C1H22O11 برابر 342.0 گرم است. بنابراين

M= 11.2/342*0.25=0.131M

مثال 4

غلظت مولي گاز ها در شرايط استاندارد چقدر است؟

M=1/22.4=0.0446M

استوکيومتري محلول ها

از حاصل ضرب حجم محلول در غلظت مقدار جسم حل شونده بدست مي آيد؟

 

Amount = C * V

مثال 5

چه مقدار NaOH با جرم ملکولي 40 براي تهيه 25.0 ml محلول 0.1234 مولار نياز است؟

Amount = 0.025 L * 0.1234 mol/L = 3.085x10-3 mol
= 0.1234 g

مسائل خنثي سازي

در واکنش هايي مثل

 

2 HCl + Ca(OH)2 ---> CaCl2 + 2 H2O

يک مول HCl با 0.5 مول Ca(OH)2 هم ارز است

به طور مشابه در واکنش هاي اکسيداسيون احياء مثل واکنش زير يک مول KMnO4 معادل و هم ارز 5 مول FeCl2 است

 

KMnO4 + 5 FeCl2 + 8 HCl = KCl + MnCl2 + 5 FeCl3 + 4 H2O

 

در مولاريته معادله زير برقرار است

M1V1 = M2V2

اين معادله براي رقيق سازي محلول ها مورد استفاده قرار مي گيرد. اما قابل استفاده در واکنش ها نيز هست

 

 

اگر غلظت دو محلول C1 و C2 و حجم آن ها به ترتيب V1 و V2 باشد. خواهيم داشت زيرا وقتي محلولي را رقيق مي کنيم، با افزايش حجم غلظت کاهش مي ابد

Amount1 = C1 V1
Amount2 = C2 V2

C1 V1 = n C2 V2

اين معادلات براي تيتراسيون مناسب هستند و n ضريب هم ارزي است

مثال 6

چه غلظتي از 23.45 ml NaOH براي خنثي سازي 25.00 ml HCl 0.1234 M نياز است؟

 

[NaOH] = 0.02500 L * 0.1234 mol/L /0.02345 = 0.1316 M mol

مثال 7

چه غلظتي از 23.45 ml Ca(OH)2 براي خنثي سازي 25.00 ml HCl 0.1234 M نياز است؟

 

Ca(OH)2] = 0.5 * 0.02500 L * 0.1234 mol/L /0.02345 = 0.06508 M mol

اين غلظت نصف غلظت مورد نياز NaOH است. زيرا داراي ضريب هم ارزي 0.5 است. اما غلظت OH در هر دو حالت برابر است

 

molarity =

moles of solute liter of solution

x M =

y moles z L

2 M =

6 moles 3 L

مثال 8

مولاريته محلول 0.32 مول از NaCl در 3.4 ليتر چقدر است؟

molarity =	0.32 moles NaCl 3.4 L
=	0.094 M NaCl

مثال 9

مولاريته محلول ساخته شده از حل کردن 2.5 گرم NaCl در 125 ml آب چقدر است؟

molarity =

moles of solute liter of solution

2.5 g NaCl x

1 mole NaCl 58.5 g NaCl

= 0.0427 mole

molarity =	0.0427 mole NaCl 0.125 L
=	0.34 M NaCl

مثال 10

براي تهيه 400ml از محلول 1.2M چند گرم سديم کلريد نياز است؟

1.20 M NaCl =	1.20 moles NaCl 1.00 L solution

0.400 L solution x	1.20 moles NaCl 1.00 L solution
=	0.480 moles NaCl

0.480 moles NaCl x	58.5 g NaCl 1 mole NaCl
=	28.1 g NaCl

28.1 گرم نمک را به حجم 400 مي رسانيم

روش رياضي

معادله
x M =	y moles z L

جايگزيني مقادير
1.20 M =	y moles 0.400 L

بدست آوردن تعداد مول ها
y moles =	1.20 M x 0.400 L	= 0.480 moles

تبديل به گرم

0.480 mole x 58.5 g/mole = 28.1 g

 

مثال11

چند مول نمک در 300ml از محلول 0.4M نمک وجود دارد؟

0.300 L x	0.40 moles NaCl 1.00 L solution
=	0.12 moles NaCl

 

براي ساخت يک محلول استاندارد بايد با دقت محلول سازي را انجام داد. براي اين نظور فيلم محلول سازي استاندارد را ببينيد . صمناً انجام صحيح تيتراسيون را نيز در فيلم ببينيد.

فيلمي را ببينيد که ساخت محلول 1 مولار سولفات مس را در دويست و پنجاه ميلي ليتر اب نشان مي دهد

استفاده از فرمول m1v1=m2v2 ، در اين فيلم براي ساخت محلول 0.1 مولار سولفات مس از محلول 1 مولار سولفات مس نشان داده شده است

يک سايت که محاسبات غلظت بر حسب مولار انجام مي دهد http://www.lgpnet.com/science/molarity.htm

يک سايت که با دادن غلظت و حجم محلول و جرم ملکولي، جرم ماده را محاسبه مي کند http://www.tocris.com/molarityCalculator.php