الکتروفورز
هدف از تدوين اين دستورالعمل، تشريح روند انجام کار و کنترل کیفی دستگاه الکتروفورز می باشد.
1- هدف
هدف از تدوين اين دستورالعمل، تشريح روند انجام کار و کنترل کیفی دستگاه الکتروفورز می باشد.
2- دامنه کاربرد
اين دستورالعمل در بخش هماتولوژی كاربرد دارد.
3- مسؤليت اجرا
مسؤليت اجراي اين روش اجرايي با کارمندان فنی بخش های هماتولوژی و مسئول تضمین کیفیت مي باشد.
4- تعاريف
ندارد
5- شرح اقدامات
اصول:
جدا سازی پروتئین ها بر اساس اختلاف در شارژ الکتریکی انها در یک بستر بافری توسط این سیستم انجام می گیرد.
محلولها مواد و وسایل مورد نیاز در الکتروفورز همو گلوبین:
1-خون تام روی ضد انعقاد EDTAمثل CBC.
2-محلول Hemolysingجهت تهیه همولیزات.
3-محلول بافر Tris Glycine.
4- محلول رنگزا Amidoblack.
5- محلول رنگ بر.
6- محلول دهیدراتاسیون (متانول خالص ).
7- محلول شفاف سازی یا Cleaning.
8- ژل استات سلولز .
9- اپلیکاتور و شابلون .
آماده سازی محلول ها :
1- تهیه همولیزات :خون تام را 3 مرتبه با سرم فیزیولوژی شستشو می دهیم ودر مرحله اخر به کمک یک سمپلر λ1000تمت می سرم فیزیولوژی را خارج کرده به طوریکه Packed Cellحاصل شود.λ20از Packed Cell رابه λ100از محلول همولیزینگ در یک لوله اضافه کرده و خوب مخلوط می کنیم 3-2 دقیقه صبر می کنیم تا محلول شفاف حاصل شود.دقت شود که λ20از قسمت پایین لوله حاوی Packed Celبرداشته و پس از برداشت نوک سمپلر ازاضافی خون پاک شود.
2- تهیه محلول بافر Tris Glycine:یک بسته پودر بافر به 1500mlاب مقطر اضافه گردد.این محلول به مدت یک ماه در دمای یخچال پایدار می باشد.
3- محلول رنگ بر :100mlاب مقطر +100ml متانل خالص +10ml اسید استیک گلاسیال
توجه شود اسید استیک باید هر بار بطور تازه به مخلوط اب و متانل اضافه گردد.
سایر محلول ها به شکل اماده قابل استفاده می باشند.